Molecular Diagnostics: real-time PCR

In prezent, mecanismul de diagnostic molecular proiectat reacție în lanț a polimerazei (PCR), care a fost un impuls pentru dezvoltarea unui număr mare de metode de diagnosticare a bolilor, bazate pe determinarea materialului genetic. Pentru realizarea unui fragment de genă PCR în timp real , folosind (în special acidul nucleic) din agentul cauzal, care nu se găsește în alte persoane.

Principiul PCR este multiplicarea unei anumite milioane fragment ADN patogen de ori prin ADN polimerază într-o unitate specială, denumită termociclor, care asigură repetarea ciclică a regimului de temperatură pentru un anumit program.

Diagnostics PCR permite repetarea unei serii de amplificări, menținerea activității enzimei. Când amplificarea are loc lin, într-un singur ciclu de numărul de copii ale unui anumit fragment de ADN de la dublu agent patogen, după treizeci de cicluri - o sută zece. Acesta este motivul pentru PCR este utilizat în diagnosticul pentru a determina patogeni suficient de mici, a căror identificare este imposibilă fără ea.

Trebuie remarcat faptul că ARN-ul nu poate fi un model pentru PCR în timp real. Prin urmare, în scopul de a detecta ARN viral înainte de amplificarea ADN-ului pentru a obține corelat cu fragmentul corespunzător al acestuia. Reacția în lanț a polimerazei permite producerea ADN și ARN de măsurare patogen. Informația astfel obținută este utilizată pentru monitorizarea eficacității terapiei utilizate, precum și evaluarea prognosticului clinic.

În plus, PCR în timp real nu necesită acțiuni suplimentare cu privire la decriptarea ADN țintă sau ampliconilor, care servesc ca o barieră în diagnosticul corect și să conducă la rezultate false. Această abordare face posibilă nu utilizează etapa de electroforeză, ceea ce conduce la un produs de reducere a riscului de reacție în lanț a polimerazei. De asemenea, din cauza scăderii numărului de manipulări cu agentul, reduce timpul studiului, se simplifică procesul, reduce riscul de erori. PCR, de asemenea, vă permite să specificați numărul inițial de copii ale ADN-ului agentului patogen într-un studiu clinic pentru a ajuta la identificarea perioadelor de exacerbări și să ia măsuri în timp util pentru a vindeca pacientul.

Astăzi, există un număr mare de metode de amplificare de fixare în timp real. Cele mai frecvent utilizate diferite tehnici care aplica amplicon corelate cu sonde fluorogenice, dintre care intensitatea radiației variază în funcție de acumularea de amplicon și înregistrate în timp real cu ajutorul unui dispozitiv special numit termocicluri cu un modul optic. Acesta oferă un nivel ridicat de sensibilitate a analizei. În același produs PCR poate fi detectat, împreună cu o cantitate mare de produse secundare, într-un moment folosind electroforeza aceasta, în unele cazuri, nu se observă.

Prin PCR folosind eșantioane de control pozitive și negative în timp real. Astfel, probele pozitive și negative într-un studiu analizat ca probe separate, o probă de control, în care este introdusă în fiecare astfel de probă și trece toate etapele de analiză.

Astăzi, există un număr mare de dispozitive pentru efectuarea reacției în lanț a polimerazei. Acestea includ Bio-Rad, Applied Cepheid si Roche. Fiecare dintre ele are avantaje și dezavantaje

Trebuie remarcat faptul că PCR - metoda de diagnostic utilizate pe scară largă în-științifice, de cercetare și centre de diagnostic din intreaga lume, deoarece oferă posibilitatea de a efectua o interpretare imediată a rezultatelor.