Metode microbiologice pentru studiul apei, a solului și a aerului

Microorganismele -, creaturi unicelulare cea mai mare parte mici, care sunt larg răspândite în natură. Acestea se găsesc în toate mediile (aer, sol, apa) la oameni și animale, în plante.

Diversitatea calitativă și numărul de organisme depind în primul rând de compuși nutriționale. Dar este de asemenea important ca umiditatea, temperatura, aerisire si actiunea razelor de soare și de alți factori.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. Metode pentru medii naturale sanitare si studii microbiologice poate detecta prezența agenților patogeni și pentru a determina cantitatea acestora , în conformitate cu rezultatele obținute, să elaboreze măsuri pentru a elimina sau de prevenire a bolilor infecțioase. În plus, este necesar cont cantitativ pentru modelarea ecosistemelor și dezvoltarea proceselor naturale de guvernare. . Să considerăm în continuare care sunt metodele de examinare microbiologică.

sol

Acesta este considerat de cercetători ca fiind una dintre căile posibile de transmitere a patologiilor infecțioase. Cu secrețiile pacient uman sau animal în agenții patogeni din sol penetrant. Unii dintre ei, în special, de spori, poate persista în sol pentru o lungă perioadă de timp (uneori de zeci de ani). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). Căderii patogeni din sol astfel de infecții periculoase , cum ar fi tetanosul, antraxul, botulismul, și așa mai departe. Metode de studiu sanitar-microbiologice a solului permit definirea „count microbiene“ (numărul de microorganisme în sol a unui gram) și indicele de coli (numărul de E. coli) .

Analiza solului: o privire de ansamblu

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. Metode pentru examinarea microbiologică a solului trebuie să fie în primul rând atribuită microscopie directă și cultură pe solid mediu nutritiv. Populațiile de microorganisme și grupurile lor care populează solul, diferă cu privire la statutul taxonomic și funcțiile ecologice. În știință, ele sunt reunite sub termenul generic de „biotei solului.“ Primer - habitat număr foarte mare de microorganisme. In gram de sol este prezent la 1 la 10 miliarde celule. În acest mediu, ia activ descompunerea materiei organice, cu participarea diferitelor microorganisme saprofite.

Studiile microscopice de metode microbiologice: etapele

Analiza mediului începe cu prelevarea de probe. În acest scop, curățate în prealabil și cuțit alcool ras (lopata poate fi utilizat). După aceea, preparatul probei. Următorul pas - numărarea celulelor frotiurilor colorate. Luați în considerare fiecare pas separat.

Prelevarea de probe

În analiza solurilor agricole tind probă prelevată de la o adâncime a întregului strat. Mai întâi îndepărtat 2-3 cm deasupra solului, deoarece acesta poate fi prezent într-o microfloră neesențial. După aceea, cu o suprafata de teren studiate ia monoliți. Lungimea fiecăreia dintre ele trebuie să respecte grosimea stratului din care doriți să eșantion.

Pe un teren de 100-200 mp. 7-10 m eșantioane selectate. Greutatea fiecărui - de ordinul a 0,5 kg. Probele trebuie să fie bine amestecat în sac. Apoi luați proba medie cântărind aproximativ 1 kg. Ar trebui să fie plasat în pergament pachet (steril) închis într-un sac de pânză. Înainte de a direcționa analiza probei depozitate în frigider.

sondaj Pregătirea

Solul agitat turnat pe sticlă uscat. Pre-șterge cu alcool și arde deasupra arzătorului. Cu un sol spatulă amestecat bine și extins uniform. Este obligatoriu pentru a elimina rădăcinile și alte elemente străine. Pentru a face acest lucru, utilizați pensetă. Înainte de pensete operare și spatule deasupra arzătorului aprins și lăsat să se răcească.

Dintre diferitele parcele de sol distribuite pe sticla, selectat porțiuni mici. Ei au cântărit într-un vas de porțelan pe o scară tehnică. является специальная обработка образца. Obligatoriu pas metoda microscopică a studiilor microbiologice este procesarea specială a eșantionului. 2 trebuie să fie pregătite în prealabil, flacon steril. Dimensiunea lor nu trebuie să depășească 250 ml. Unul din flacoane este turnată în 100 ml de apă de la robinet. Deoarece este nevoie de 0,4-0,8 ml probă de lichid de sol și umezit într-o pastă. Amestecul trebuie frecat cu un deget sau cauciuc pistil timp de 5 minute.

Apa din primul balon au fost transferate într-o masă de sol vas gol. În plus, frecarea spate. După această masă se transferă într-un balon în apropierea flacăra arzătorului. Container cu suspensie de sol a fost agitată pe un agitator timp de 5 min. După aceea, se lasă să se sedimenteze timp de aproximativ 30 de secunde. Acest lucru este necesar pentru a permite particulelor mari să se stabilească. După o jumătate de masă minut este utilizată pentru prepararea preparatului.

Numărătorile de celule pe frotiuri fixe

, разработанному Виноградским. Studiul microscopic direct al solului se realizează prin metoda studiilor microbiologice, dezvoltate Vinogradskii. În anumit volum al suspensiei a fost numărat numărul de celule de microorganisme. Studiind frotiuri fixe pot stoca medicamente pe termen lung și de a efectua calcule în orice moment.

Prepararea medicamentului după cum urmează. O anumită cantitate de suspensie (în mod tipic 0.02-0.05 ml), se aplică cu ajutorul unei micropipete pe diapozitiv. La această soluție s-a adăugat o picătură de agar-agar (polizaharid agaropectin amestec și se extrage de agaroză din alge brune și roșii la Marea Neagră), agitat rapid si se intinde pe o suprafata de 4-6 mp. cm. Pap uscat la aer și fixate timp de 20-30 minute. alcool (96%). Apoi, medicamentul umezită cu apă distilată și plasate în p p carbolice eritrozină 20-30 min.

După colorare, se spală și se usucă în aer. Numărătorile de celule efectuate de obiectivul de imersie.

Însămânțarea pe medii solide

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. Metode de microscop pentru examenul microbiologic poate detecta un număr mare de microorganisme. Dar , în ciuda acestui fapt, metoda de inoculare este cel mai frecvent în practică. Esența ei constă în însămânțarea cantitate de (suspensie sol) medicament într-un vas Petri pe un mediu solid.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. Această metodă de cercetare microbiologică ia în considerare nu numai cantitatea , ci , de asemenea , grupul, iar în unele cazuri, și compoziția de specii din flora microscopice. Numărarea numărul de colonii produse, de obicei, din fundul vasului Petri în lumina transmisă. Pe suprafața calculată plasat un marker sau cerneală dot.

Analiza apei

Microflora a corpului de apă, de regulă, reflectă compoziția microbiană a solului în jurul acestuia. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. În acest context, metodele de analiză sanitară microbiologică a apei și a solului sunt de o importanță deosebită în practică în studiul stării unui anumit ecosistem. Apa proaspătă conține, de regulă, coci, bacterii sub formă de bară.

Anaerobilor în apă găsite în cantități mici. De regulă, se înmulțesc în partea de jos a corpurilor de apă, în noroi, luând parte la procesul de purificare. oceane microflorei și mările reprezentate în mod avantajos, bacteriile halofite (halofile).

În apă, fântâni arteziene sunt, practic, nici microorganisme. Acest lucru se datorează capacității de filtrare a stratului de sol.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. Metodele convenționale de cercetare a apei microbiologice considerată definiția indicelui dacă-microbiene și coli-titrului sau. Primul indicator definește numărul de bacterii în 1 ml de lichid. Indexul reprezintă numărul Coli de coliformi prezente într-un litru de apă, iar în cazul în titru - numărul minim sau maxim de lichid de diluție în care acestea pot fi detectate.

Determinarea numărului microbiene

Această metodă sanitară examinare microbiologică a apei este după cum urmează. În 1 ml de apă se determină numărul de anaerobi mezofile și facultativi (intermediar) aerobi capabile de pe carne peptonă agar (mediu primar), la 37 ° C. în timpul zilei, pentru a forma colonii vizibile la o mărire de 2-5 p. sau ochiul liber.

является посев. Etapa cheie a metodei de analiză microbiologică a apei este semănat. Deoarece fiecare probă este semănat cu cel puțin 2 volume diferite. Când analiza apei de la robinet în fiecare cupă este realizată din 1-0.1 ml de lichid pur și contaminat 0.01-0.001 ml. Pentru inoculare de 0,1 ml sau volum mai mic de lichid se diluează cu apă distilată (sterilă). Consecvent pregătesc diluții zecimale. 1 ml din fiecare dintre ele se face în două vase Petri.

BREEDING umplut cu agar nutritiv. Ea trebuie să se topească mai întâi, și se răcește la 45 ° C. După agitare, mediul activ este lăsat pe o suprafață orizontală de solidificare. La 37 de grade. culturile sunt crescute pe tot parcursul zilei. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. Metoda considerată de cercetare în domeniul apei microbiologice ia în considerare rezultatele acestor vase în care numărul de colonii în intervalul de la 30 la 300.

aer

Este considerat un motiv de tranzit pentru microorganisme. являются седиментация (оседание) и аспирация. Principalele metode de studii microbiologice de sedimentare a aerului (sedimentare) și aspirație.

mediu de aer microfloră este arbitrar împărțit în variabile și constante. Primul grup include drojdie, coci cromogen, spore purtătoare bacillus coli și alte microorganisme care sunt rezistente la uscare, expunerea la lumină. Reprezentanți ai microflorei variabilă, care pătrund în aer din habitatul lor obișnuit, păstrează mult timp vitalitatea.

În aerul orașelor mari microorganismelor mult mai mult decât în mediul aerian al zonelor rurale. De-a lungul mărilor, pădurile sunt foarte puține bacterii. Purificarea aerului facilitează precipitarea: zăpadă și ploaie. microbi în interior mult mai mult decât în spații deschise. Numărul acestora este crescută în timpul iernii, în absența ventilației regulate.

sedimentare

считается простейшим. Această metodă de cercetare microbiologică în microbiologie este considerat a fi cea mai simplă. Ea se bazează pe decantare picăturilor și particulelor de pe suprafața de agar într-un vas Petri deschisă sub influența gravitației. Metoda de sedimentare nu poate determina cu exactitate numărul de bacterii din aer. Faptul este că, într-o cupă deschisă pentru a prinde fracția fină a particulelor de praf și picăturile de bacterii destul de dificil. Pe suprafața particulelor reținute în principal, de mari dimensiuni.

Această metodă nu este utilizată pentru analiza aerului. Acest mediu caracterizat prin fluctuații mari în viteza de curgere a aerului. Sedimentarea poate fi totuși utilizat în absența unor dispozitive mai sofisticate sau sursa de energie electrică.

Determinarea numărului de microbiene realizată prin metoda Omelyansky. În conformitate cu acesta, timp de 5 minute pe o suprafață de 100 de agar pătrat. cm stabilește un număr de bacterii este prezent în 10 litri de aer.

Comanda 535 „Cu privire la unificarea metodelor microbiologice de investigare“

Analiza bacteriologică ocupă un loc important în activitățile complexe clinice și de laborator care vizează diagnosticarea, prevenirea și tratamentul diferitelor boli infecțioase. Cu toate acestea, studiul mediului, acestea nu sunt limitate.

De o importanță deosebită este analiza bacteriologică a materialului biologic în spitale. Pentru cercetările efectuate în unitățile sanitare, a crescut cerințele. Scopul ordinului „Cu privire la unificarea metodelor microbiologice de investigare“ este de a îmbunătăți analiza bacteriologică, îmbunătățirea calității și eficienței diagnostice microbiologice.

Examinarea microscopică a frotiurilor la femei

Este o metodă cheie de analiză pentru diagnosticarea infecțiilor cu transmitere sexuală, infecții, și infecții oportuniste (bacterii oportuniste).

Analiza microscopică a evalua compoziția calitativă și cantitativă a microflorei, verifică corectitudinea eșantionării. De exemplu, prezența epiteliului vaginal în tampoane prelevate din canalul cervical indică o încălcare a regulilor de selecție a unei probe biologice.

Se spune că examinarea microbiologică în acest caz, este urmată, în general, de unele probleme. Acestea sunt legate de faptul că, în tractul genital inferior se prezintă în mod normal o microfloră diversă, care variază de la diferite vârste. Pentru a îmbunătăți eficiența cercetării și au elaborat norme standardizate.

Diagnosticul infecțiilor virale

Aceasta se realizează prin metode de detectare a ARN și ADN patogeni. Acestea se bazează în principal pe determinarea secvențelor de nucleotide în materialul patologic. În acest scop, sondele moleculare. Ele sunt produse în mod artificial acizi nucleici complementare (complementar) acizii virali marcați cu un marker radioactiv sau biotina.

Particularitatea metodei se repetă copierea fragmentului de ADN specific conținând câteva sute de (sau zeci de) de nucleotide perechi. replicare (copiere) este că extensia poate începe numai în anumite unități. grundul (primeri) utilizate pentru a le crea. Acestea sunt oligonucleotide sintetizate.

Diagnosticare PCR (reacție în lanț a polimerazei) este simplu în execuție. Această metodă vă permite să obțineți rapid rezultatul prin utilizarea unei cantități mici de material patologic. Utilizarea diagnostice PCR identifică infecții latente (ascunse) acută, cronică și.

Când sensibilitatea acestei metode este considerată mai preferabilă. Cu toate acestea, sistemele actuale de testare nu sunt fiabile suficient, astfel încât diagnosticul PCR nu poate înlocui complet metodele tradiționale.