Testele serologice: tipuri, utilizare

Diagnosticul de laborator practic toate bolile infectioase se bazează pe detectarea sângelui în anticorpii pacientului, care sunt produse de antigen patogen, metode serologice. Ei au intrat în practica medicală la sfârșitul secolului XIX - începutul secolului XX.

Dezvoltarea științei a ajutat la definirea structurii antigenice de microbi și formule chimice ale toxinelor lor. Este posibil să se creeze ser nu numai terapeutic, ci și de diagnostic. Acestea sunt obținute prin administrarea agenților patogeni atenuați animalelor de laborator. După câteva zile de înmuiere iepuri din sânge sau șoareci produse utilizate pentru identificarea bacteriilor sau a toxinelor lor folosind teste serologice preparate.

Manifestarea exterioară a acestei reacții depinde de condițiile de formulare și starea antigenelor din sângele pacientului. În cazul în care microbii sunt particule insolubile, ele sedimenteze, lizată, imobilizat sau legat în ser. Dacă antigenii sunt solubili, apare fenomenul de neutralizare sau precipitare.

aglutinare (PA)

testul de sero este foarte specific. Este ușor de realizat și este destul de clar pentru a detecta rapid prezența antigenelor în serul pacientului. Este utilizat pentru setarea reacție Vidal (diagnostic de febră tifoidă și paratifoidă) și Weigl (tifos).

Ea se bazează pe o interacțiune specifică între anticorpii umani (sau aglutinele) și celule microbiene (agglyutenogenami). Ca urmare a interacțiunii lor se formează particule care precipită. Acesta este un semn pozitiv. Pentru setarea de reacție pot fi utilizați agenți vii sau moarte microbiene, fungi, protozoare, celule sanguine și celule somatice.

Reacția chimică este împărțit în două etape:

1. compus specific anticorpi (AT) cu antigeni (Ag).
2. Non-specifice - depunerea conglomeratelor AG-AT, și anume formarea aglutinează.

Reacție aglutinare indirectă (TPHA)

Această reacție este mai sensibil decât cel precedent. Este utilizat pentru diagnosticul bolilor cauzate de bacterii, paraziți intracelulari, protozoare. Este atât de specific, care poate detecta chiar si concentratii foarte mici de anticorpi.

Pentru formularea ei folosind celule roșii din sânge de oaie purificată și celule roșii sanguine umane pretratate cu anticorpi sau antigene (depinde ce laborator vrea să găsească). In unele cazuri, celulele roșii din sânge uman tratate cu imunoglobuline. răspunsul serologic al eritrocitelor este considerat valabil dacă precipitarea acestora a avut loc în partea de jos a tubului. Reacția pozitivă putem spune când celulele sunt aranjate sub forma unei umbrele inversat, care ocupă întregul fund. Reacția negativă se punctează când celulele roșii din sânge se stabilească sub forma unei coloane sau a butoanelor în centrul fundului.

reacția de precipitare (RP)

Reacțiile serologici de acest tip servesc la identificarea antigenilor particule extrem de mici. Acest lucru poate fi, de exemplu, proteine (sau porțiuni ale acestora), compuși de proteine cu lipide sau glucide, o parte din bacteriile si toxinele acestora.

Sera pentru reacția se obține prin infestarea artificială a animalelor, de obicei iepuri. În această metodă, puteți obține absolut orice ser precipitant. Stadializarea serologic precipitare mecanism similar de acțiune pe aglutinare. Anticorpii conținute în ser se leagă la antigene în soluția coloidală pentru a forma molecule mari de proteine, care sunt depozitate pe fundul tubului sau pe substrat (gel). Această metodă este considerată a fi foarte specifice si poate detecta chiar urme ale substanței.

Folosit pentru a diagnostica ciuma, tularemia, antrax, meningita si alte boli. De asemenea, implicate în examinarea medico-legale.

Testul de precipitare cu gel

Testele serologice pot fi efectuate nu numai într-un mediu lichid, dar în gelul de agaroză. Aceasta se numește metoda de precipitare difuză. Cu aceasta, studia compoziția amestecurilor antigenice complexe. Această metodă se bazează pe chimiotaxiei antigeni la anticorpi, și invers. Gelul se mișcă unul față de altul, la diferite viteze și întâlnire pentru a forma linii de precipitare. Fiecare linie - un set de K-AT.

Neutralizarea exotoxină antitoxina (RN)

ser antitoxic poate neutraliza exotoxină care produc microorganisme. Pe baza acestor date și teste serologice. Microbiologie utilizează această metodă pentru titrare de seruri, toxine și toxoids, precum și activitatea lor terapeutică. Rezistența la neutralizarea toxina este determinată de către unitățile convenționale - AE.

Mai mult decât atât, datorită acestei reacții poate determina specia sau tipurile aparținând exotoxină. Acesta este utilizat în diagnosticul de tetanos, difterie, botulism. Studiul poate fi realizat „pe sticla“, și într-un gel.

reacția de liză (RL)

Serul imun, care intră în corpul pacientului, are, în afară de funcția sa principală de imunitate pasivă, proprietățile litice chiar și. Este capabil de a dizolva agenți microbieni, virus elemente celulare și străine care intră în corpul pacientului. În funcție de specificitatea anticorpilor incluși în serul izolat bactericidin, Citolizinele, spirohetoliziny, hemolizine și alta.

Acești anticorpi specifici se numesc „complement“. Acesta se gaseste in aproape toate fluidele corpului, are o structură complexă de proteine și este foarte sensibilă la creșterea temperaturii, scuturată, acizi și lumina solară directă. Dar, în stare uscată este capabil să mențină proprietățile lor litice de până la șase luni.

Există câteva tipuri de teste serologice de acest tip:

- bacteriolysis;

- hemoliza.

Bacteriolysis se realizează cu ajutorul pacientului în serul sanguin și ser imun specific cu germeni vii. În cazul în care, atunci cercetătorul vede liza bacteriilor, iar răspunsul va fi considerat ca un număr suficient de complement pozitiv este prezent în sânge.

Al doilea răspuns serologic de sânge este că suspensia de eritrocite tratate hemolizine pacient conținând ser, care sunt activate numai în prezența unui anumit compliment. Dacă există, atunci laboratorul uitam dizolvarea celulelor roșii din sânge. Această reacție este utilizată pe scară largă în medicina modernă pentru a determina titrul de complement (adică, valoarea sa cea mai mică provocând liza celulelor roșii din sânge) în serul sanguin și pentru producerea de analiză de legare a complementului. Acesta a fost în acest mod au condus reacția serologic pentru sifilis - Wasserman.

fixare a complementului (RSK)

Această reacție este utilizată pentru detectarea anticorpilor din ser la pacient a unui agent infecțios precum și pentru a identifica inițiatorul structurii antigenice.

Până în acest moment, am descris un simplu teste serologice. RAC a considerat reacție dificilă, deoarece interacționează nu două, ci trei elemente: un anticorp, un antigen și să completeze. Esența ei constă în faptul că interacțiunea dintre anticorp și antigen are loc numai în prezența proteinelor compliment care sunt adsorbite pe suprafața format complexul K-AT.

Înșiși antigenele după adăugarea complement, supuse unor modificări substanțiale, care indică calitatea reacției. Acest lucru poate fi liza, hemoliza, imobilizare, bactericide sau efect bacteriostatic.

Reacția se produce în două faze:

1. Formarea de anticorpi antigen, care nu este vizual cercetător vizibil.
2. Schimbarea antigenului sub acțiunea complementului. Această fază de obicei, poate fi urmărită cu ochiul liber. În cazul în care răspunsul vizual nu este vizibil, apoi utilizați sistemul indicator suplimentar care permite detectarea modificărilor.

sistem de indicatori

Această reacție se bazează pe legarea complementului. Eprubetele oră după setarea RSK adăugat eritrocite de oaie purificate și hemolitică ser care nu conține complement. În cazul în care tubul a fost lăsat complement nelegat, se va alătura complex N-AT format între celule sanguine ovine și hemolizinei și provoacă dizolvarea lor. Acest lucru ar însemna că DGC este negativ. Dacă celulele roșii din sânge au rămas intacte, apoi, în consecință, reacția este pozitivă.

hemaglutinarea (RHA)

Există două hemaglutinarea fundamental diferite. Unul dintre ei - serologică, este utilizat pentru determinarea grupelor sanguine. În acest caz, eritrocitele interactioneaza cu anticorpi.

A doua reacție nu este legată de serologice, deoarece celulele roșii din sânge reacționează cu hemaglutinina produs de viruși. Deoarece fiecare excitator acționează numai asupra eritrocitelor specifice (pui, ovine, maimuțe), putem presupune această reacție strict specific.

răspuns clar pozitiv sau negativ, este posibil pentru localizarea celulelor sanguine în partea de jos a tubului. În cazul în care figura seamănă cu o umbrelă răsturnată, atunci virusul dorit este prezent în sângele pacientului. Și dacă toate celulele roșii din sânge format ca un coloane de monedă, nu există agenți patogeni necunoscuți.

Reacția de inhibare a hemaglutininei (HAI)

Această reacție foarte specifică, care permite să se stabilească forma, tipul de virus sau prezența anticorpilor specifici în serul sanguin al pacientului.

Esența ei constă în faptul că anticorpii adăugat la tubul care conține materialul de testat, previne depunerea de antigeni pe eritrocite, oprind astfel hemaglutinare. Aceasta este o indicație calitativă a prezenței antigenilor specifici în sânge la un anumit virus dorit.

Reacție imunofluorescență (RIF)

Reacția se bazează pe capacitatea de a identifica complecși cu microscopie fluorescentă AT-AH după tratament coloranți flyuorohromnymi. Această metodă este simplu de utilizat, nu necesită izolarea culturii pure și ia puțin timp. Este indispensabil pentru diagnosticarea rapida a bolilor infectioase.

În practică, aceste teste serologice sunt împărțite în două categorii: directe și indirecte.

RIF directă a produs antigen care a prelucrat anterior ser fluorescent. Și indirectă este că medicamentul este tratat mai întâi cu reaplicat zer fluorescent, care este specific pentru proteinele complexului K-AT și celulele microbiene devin vizibile prin microscopie diagnosticum convențional cuprinzând anticorpi la antigenul dorit și apoi.